液氮是多少度，10L液氮多久会挥发完

培养细胞的你，是否经常发现自己养的细胞怎么都不如文献中的漂亮？实验是科研的基础，看似简单重复的实验操作，其中却有很多技巧和细节。有的人可以快速掌握，并悟得先机，有的人则是日复一日的机械性操作。经验藏着掖着不如分享出来，独乐乐不如众乐乐。如果你是细胞培养中的高手，快来参加“如何把细胞养得更漂亮”经验分享活动吧，在分享经验造福广大科研汪的同时，还可以赢得心动大奖。

1 活动规则

您在养细胞的路上总有或多或少的心得体会，分享一下如何把细胞养得更漂亮的小妙招，就有机会赢得心动大奖哦！快来或点击“阅读原文”填写表单参加这个伟大的活动吧！如果描述详尽，自然是极好的，当然，浓缩的都是精华，能简明扼要的传达出您的经验，或者邀请专家团来助阵也是非常欢迎的。

2 评选规则

赛业生物在干细胞领域已深耕13年，拥有国际一流的干细胞产品研发和生产团队。赛业生物的专家团成员具备丰富的细胞培养经验，专家团成员将根据参赛者提交内容的详细程度，价值高低评选出一二三等奖。

3 大赛日程

投稿时间：2019年10月14日——2019年11月30日

评选时间：2019年12月1日——2019年12月6日

获奖公示：2019年12月12日

4 奖项设置

一等奖 1名

二等奖 2名

三等奖 3名

5 抛砖引玉

（1）文献案例寻找启发

想要做好实验，好用的产品必不可少。赛业生物专注干细胞领域13年，干细胞系列产品因优良的增殖和分化潜能已助力广大科研工作者取得丰硕的科研成果，产品也竞相见诸于各大期刊，累积超过3000多篇论文引用。如何把细胞养得更漂亮？希望赛业客户发表的文献案例能给你一些启发。

Mg²⁺通过高表达的MagT1促进成骨分化

Sihan Lin, Wenjie Zhang, Xinquan Jiang. et al. A Magnesium-Enriched 3D Culture System that Mimics the Bone Development Microenvironment for Vascularized Bone Regeneration. Advanced Science. 2019 DOI: 10.1002/advs.201900209

人脂肪源性间充质干细胞（haMSCs）和小鼠间充质干细胞（mMSCs）被封装在MCTs腔内，模拟具有复杂细胞-细胞和细胞-基质相互作用的干细胞巢

Immihan Ceren Yasa, Ahmet Fatih Tabak, Oncay Yasa, Hakan Ceylan, Metin Sitti. 3D-Printed Microrobotic Transporters with Recapitulated Stem Cell Niche for Programmable and Active Cell Delivery. Advanced Functional Materials 2019, 148, 1808992. DOI: 10.1002/adfm.201808992.

用人骨髓间充质干细胞诱导分化成骨细胞，对晚期成骨细胞条件缺失shn3可以增强SLIT3表达，提高H型血管内皮细胞水平

Ren Xu, Alisha Yallowitz, An Qin. et al. Targeting skeletal endothelium to ameliorate bone loss. Nature Medicine 2018 DOI: 10.1038/s41591-018-0020-z

6 赛业专家们的小建议

A. 复苏小妙招

复苏过程非常关键，直接影响这一株细胞的生长状态和传代能力。一般而言，复苏就是将细胞株从液氮中拿出来后立刻放入-80°C冰箱数分钟，待液氮挥发后迅速放入37℃振荡水浴，俗称“快融”过程，这一过程就是尽快融解细胞内的冰晶，减少对细胞的损伤。下一步就是将细胞放入培养基，一种方法是直接加入到培养基，待第二天细胞贴壁后更换新鲜的培养基；第二种方法是加入数倍体积的培养基混匀后，低速离心去掉对细胞有毒害作用的DMSO，然后把细胞接种到培养皿中。

B. 消化过程注意事项

消化过程会破坏细胞表面蛋白，从而影响细胞状态。目前使用较多的操作是，吸走培养基后先用PBS洗1-2遍，然后加入胰酶进行消化，消化到细胞变圆、少量细胞脱落即可加入培养基进行终止。接下来是离心，除去上清。加入适量培养基将细胞吹匀，再转移到培养皿的过程也很关键。吹打过程中用力要适度，既要避免用力过小细胞未分散，又要避免用力过大细胞悬液沾黏管壁造成损失，还要避免吹打过多机械剪切力伤害细胞。接种细胞后要适度摇晃培养容器，让细胞分布均匀。对于接种的细胞，在空间允许的条件下，尽量平放不要堆着放。此外，关培养箱时需尽量轻柔，有时候细胞出现同心圆分布的情况，就是由于关门太用力，导致培养基晃动，形成纹路。

C. 冻存注意事项

一般情况下，冻存的细胞越多越好。培养中的细胞，建议在细胞状态好、增殖迅速时就冻存一些，而不是养过很多代用不完再冻存。细胞消化离心去上清后加入细胞无蛋白非程序冻存液调整密度到1×10⁶cell/mL，然后转入冻存管，直接放入-80℃冷冻过夜，注意冻存管摆放不能过于密集，以免处于内部位置的细胞冻存效果差。冻存完成后转入液氮中长期保存。细胞不要长期保存在-80℃冰箱，以免活力下降。

D. 其他注意事项

除上述的主要操作步骤以外，常用的试剂存储也很重要。FBS正常存储温度是-20℃，在要使用之前先放到4℃融化，如果放到室温或者水浴锅中融解，血清中的蛋白会大量析出从而影响培养效果。另外胰酶需尽量分装保存，胰酶在室温下失活很快，近期用的放在4℃，其他就存储在-20℃。最后就是细胞需要及时传代和换液，通常为2-3天一次。过于频繁会影响细胞生成长微环境，间隔过长则会有营养匮乏、酸碱度失衡等问题。

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